營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的滅菌方法主要是高壓蒸汽滅菌法，以下從滅菌原理、操作步驟、注意事項、常見問題及解決方法等方面為你詳細(xì)介紹：
高壓蒸汽滅菌法利用高溫高壓的水蒸氣來殺滅包括芽孢在內(nèi)的所有微生物。在密閉的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，隨著壓力的升高，水的沸點也隨之升高，從而使滅菌鍋內(nèi)的溫度能夠達(dá)到121℃甚至更高。在這樣的高溫環(huán)境下，微生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)會發(fā)生不可逆的變性凝固，核酸結(jié)構(gòu)被破壞，細(xì)胞膜的通透性增加，最終導(dǎo)致微生物死亡。
操作步驟
裝載培養(yǎng)基
將分裝好的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基容器(如三角瓶、試管等)合理放置在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)。注意容器之間要留有一定的空隙，以保證蒸汽能夠充分流通，使培養(yǎng)基均勻受熱。
避免培養(yǎng)基容器堆放過于緊密，防止蒸汽無法穿透，導(dǎo)致滅菌不徹底。
加水
向滅菌鍋內(nèi)加入適量的水，水位一般要達(dá)到滅菌鍋水位線指示的位置。加水過多可能會導(dǎo)致水進(jìn)入培養(yǎng)基容器內(nèi)，污染培養(yǎng)基；加水過少則可能在滅菌過程中因水分蒸發(fā)而使滅菌鍋干燒，損壞設(shè)備。
關(guān)閉滅菌鍋門
確保滅菌鍋門密封良好，防止蒸汽泄漏。檢查門上的密封圈是否完好，有無破損或老化現(xiàn)象。如果密封圈有問題，應(yīng)及時更換。
設(shè)置滅菌參數(shù)
根據(jù)培養(yǎng)基的性質(zhì)和滅菌要求，設(shè)置合適的滅菌溫度和時間。對于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，通常滅菌溫度設(shè)置為121℃，滅菌時間為15 - 30分鐘。
一些滅菌鍋還具有排氣、保溫等階段的時間設(shè)置，需按照設(shè)備說明書進(jìn)行準(zhǔn)確設(shè)置。
啟動滅菌程序
啟動滅菌鍋，開始加熱。在加熱過程中，滅菌鍋會排出內(nèi)部的冷空氣，以保證鍋內(nèi)為純蒸汽環(huán)境。當(dāng)溫度達(dá)到設(shè)定值后，開始計時滅菌。
滅菌結(jié)束與冷卻
滅菌時間結(jié)束后，關(guān)閉滅菌鍋電源，等待鍋內(nèi)壓力自然下降至零。切勿在壓力未降至零時強(qiáng)行打開滅菌鍋門，否則會導(dǎo)致蒸汽噴出，造成人員燙傷，同時也會使外界空氣進(jìn)入鍋內(nèi)，污染培養(yǎng)基。
待壓力降至零后，打開滅菌鍋門，取出培養(yǎng)基。讓培養(yǎng)基在室溫下自然冷卻，避免直接放入冷水中冷卻，以免培養(yǎng)基容器因驟冷而破裂。
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